霉菌试验检测浅谈霉菌检测过程中几个关键问题

霉菌广泛分布于土壤、水、空气等自然环境中。由于霉菌孢子可以较长时间存活于空气中,并通过空气传播给其他物质,因此无所不在,防不胜防,给人类的生活和健康带来很多危害。霉菌及霉菌毒素污染所造成的损失早已引起人们的高度重视,特别是食品卫生领域,近年来**纷纷制订多种食品中毒菌及霉菌毒素的**标准,同时加强对霉菌检测技术的研究,并不断提出新的见解,完善该项技术。

国家标准GB16740-2014中,所有的保健食品的霉菌指标。
自从1997年各级食品卫生检测机构都全面开展霉菌的检测工作。由于霉菌检测技术起步较晚,加上其生理和形态的多样化和复杂性,至今仍有不少基本的问题得不到很好的解决。近年来,这方面的研究进展很快,国内外不少学者提出了许多改进措施,为了更好地解决霉菌检测过程中遇见的各种问题,本文根据作者的实验观察,并结合国内外有关研究的较新进展,对霉菌检测过程中几个关键问题试作全面的探讨。
1、培养基的选择
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。目前国标方法中使用的培养基有:马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO),其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长,而CAO则适合于高渗性霉菌生长,酵母菌几乎不长。
培养基的选择应根据实验材料和检验目的来确定。目前国标方法中使用的培养基有：马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、孟加拉培养基(RBC)、高盐察氏培养基(CAO)，其中PDA和RBC适合于一般的霉菌和酵母菌生长，而CAO则适合于高渗性霉菌生长，酵母菌几乎不长。

在日常检测中我们发现，有些常见的耐高渗性霉菌，如局限曲霉、谢瓦曲霉、赤曲霉、Wallemia等在PDA、RBC上生长非常缓慢或不长，而这些菌在高渗培养基如M40Y、DG18上则正常生长。孢子、形态特征发育良好，而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生长，因此，若能同时采用PDA和M40Y(或DG18)分离培养各类样品中的霉菌，将能更全面地反映出污染霉菌的菌相。特别是对干燥食品、高糖食品、淹渍食品等，更有必要同时采用M40Y或DG18。

由于霉菌中很多种类不会产生有毒的霉菌毒素，危害较小，而有的菌株即使污染数量不多，但其产生的霉菌毒素却危害较大，因此仅作霉菌计数并不能全面反映其危害程度，重要的是要知道污染菌的菌相，才能更好地判断被污染食品的安全程度。

为此，国外有些研究者设计出各类选择性培养基，可以识别产毒的霉菌。如AFPA培养基(配方：酵母提取汁20g,蛋白胨10g,柠檬酸铁铵0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,琼脂15g,蒸馏水1000mL,PH5.6)用于分离黄曲霉毒素产生菌高污染率的食品。产黄曲霉毒素的菌株黄曲霉和寄生曲霉在AFPA上30℃培养2~3天就形成背面有亮橙黄色的特征性菌落，非常容易识别。有人利用该培养基分离黄曲霉高污染食品花生、玉米等,取得了满意的结果。因此,针对不同样品,有目的地设计出相应的选择性培养基,以筛选污染菌中的危险菌群,将是一个值得探索的方向。
二、接种方式
接种方式主要有倾注法和涂布法两种。目前国际方法中采用倾注法，但近来国际上有不少学者认为霉菌计数采用涂布法更合适。

Beuchat和Matsuda等人分别对这两种方法作了大量比较试验后发现，对霉菌计数来说，涂抹法有以下几方面优越于倾注法：①培养出的霉菌菌落数较多；②培养所需的时间较短；③霉菌孢子、菌落形态特征发育完全，便于鉴定。这是因为绝大多数霉菌是好氧的，在培养基表面生长快，发育好，而混在培养基中发育就受影响，而且在培养基倾注时霉菌孢子易受热损伤。我们在自己的实验室也做了类似的比较试验，通过对30种常见霉菌的试验证实了上述的结论。因此，我们认为，霉菌计数采用涂布法既准确又省时，值得推广。

三、培养温度
经对多种常见霉菌的较适生长温度作了调查发现，大部分菌种的较适温度为25~30℃。但一些产曲霉毒素的菌株或动物致病菌则需要更高的温度，如黄曲霉35℃、构巢曲霉33℃、烟曲霉37℃、小孢子菌35℃。因此，培养温度也应根据培养目的而定，一般情况下都采用25~28℃培养，若有特殊培养目的，则应适当调节培养温度。

四、培养时间

我们对30种常见霉菌的生长速度作了调查，正常培养条件下，培养3~4天的菌落数与5~7天的基本相同，但菌种的特征不明显，因此，如果只要作霉菌计数，培养3~4天已基本达到目的，但如果还要进一步分类鉴定，则需要培养更长的时间(7~14天)。必须特别注意的是，有几类生长特别快、菌丝很多的菌，则必需在48小时以内计数，否则菌丝就会覆盖整个平皿，无法准确计数。这类菌主要有：毛霉、根霉、犁头霉、共头霉、木霉等湿度较大的样品，这类菌污染较多，检测这类样品，应提早观察记录。

霉菌菌落由孢子和菌丝组成，相当扩散，在直径9cm的平皿里，菌落数稍多就相互交叉重叠，影响计数，但数量太少又会产生较大的误差，因此选择适当的稀释度计数是保证结果准确的关键环节之一。

我们对这方面作了一些观察研究，首先是将实验菌株的斜面培养物制成含有约106个/ml的孢子悬液，并用血球计数器在显微镜下准确计数，然后将孢子悬液作10-1~10-6倍稀释，吸取不同稀释度的稀释液接种于PDA，25℃培养5天后计数。30种常见霉菌的两种不同计数方法所得结果比较显示，大部分菌株每平板含有10~50个菌落的稀释度时的计数与显微镜计数结果较接近；有近一半的菌株，每个平板含50~100个菌落已较难计数，而大部分菌株，**过100个/平皿或小于10个/平皿的计数结果就与显微计数结果存在较大差别，因此，应尽量选择10~50个/平皿的稀释度进行霉菌计数。






而对上述提及的菌丝很丰富、菌落特别扩散的毛霉、根霉、犁头霉等菌株，则应在更少的范围内计数(30个/平皿以内)。为控制霉菌的生长速度和菌落的生长范围，可在培养基中添加少量抗生素，如氯霉素(50~100mg/L)，金霉素(20~100mg/L)，庆大霉素(50mg/L)，土霉素(100mg/L)等。

六、霉菌检测过程中应特别注意的事项

1、由于霉菌检测所需的时间较长，中间又需要多次观察，因此实验**定要作好实验计划，明确观察记录的时间。

2、霉菌孢子通过空气传播，所以实验时应保持实验室平静，减少空气流通；操作时手脚要快，动作要轻，特别是培养过程中，如果观察时动作过大，早期生长出的霉菌孢子就会在培养基内扩散，形成新的菌落，导致结果不准确。
3、实验前应认真做好全面的消毒工作，包括操作人员手指、实验室空间、实验台等，实验后应**时间将有霉菌的培养物高压灭菌，防止进一步扩散。

4、对使用的菌株的生理、生态、形态、毒理、致病性必需有充分的了解，并作好相应的防扩措施,防止污染其它物品。

上述就是小编为你介绍的关于霉菌试验检测浅谈霉菌检测过程中几个关键问题的内容，对此你还有什么不了解的，欢迎前来咨询我们网站，我们会有人员为你讲解

ggtest.b2b168.com/m/