抗真菌效果检测 真菌实验室检测方法

真菌感染的实验室诊断主要包括真菌涂片、培养、鉴定、药敏试验、血清学鉴定等。
涂片
革兰染色：所有真菌、放线菌均为革兰阳性，被染成蓝黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌及诺卡菌、放线菌。
墨汁染色：印度墨汁或中国墨汁不能使隐球菌荚膜多糖着色，但可提供黑色背景从而使荚膜更亮而易于观察。脑脊液墨汁染色发现圆形厚壁孢子，有出芽、荚膜，提示隐球菌感染。隐球菌墨汁染色阳性，需进一步作真菌培养。
 培养
分生孢子头与足细胞是曲霉的特征性结构，因此培养镜检后可有效诊断。
 不同颜色培养基也具有诊断意义，例如咖啡酸琼脂培养基中新生隐球菌3天内产生棕色，而其他酵母及酵母样菌不产生棕色。
 对于马尔尼菲蓝状菌来说，不同温度培养下形态不同是它的主要特点。它是蓝状菌属中一的温度依赖性双向真菌：即37℃培养时为酵母（组织相），25℃培养时为霉菌（菌丝相），自然界中以菌丝形式存在，在组织中可形成小的圆形的或椭圆形细胞。
因为侵袭性真菌病的临床表现缺乏特异性，确诊需要组织病理学证据，而组织病理学取材复杂且风险大，如很多患者伴有严重的粒细胞缺乏和血小板减少，难以耐受组织活检；传统真菌检测方法（如痰及支气管灌洗液的真菌涂片和培养）阳性率低和检出时间比较滞后；肺部真菌感染影像学（胸部高分辨 CT）方面有相对价值的“月晕征”出现率只占侵袭性真菌病的33%～60%，且这一特征性改变仅在感染的较初5 天内出现，大多数在1周内消失。
综上所述，临床上常常采用血清学检测帮助临床早期诊断和及时**。
 血清学检测
G试验是检测1，3-β-D－葡聚糖的试验，采用的方法是动态显色法。
1，3-β-D－葡聚糖是真菌细胞壁的一种成分，广泛存在与各种真菌，只有当真菌进入体内被吞噬细胞吞噬，细胞壁被感染，对于念珠菌血症而言，G试验检测是可以选择检查方法。
G试验检测一般先于临床症状平均4天，平均早于发热5天，是早期检测的重要手段。

使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；
 静脉输注*球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；
 链球菌血症；
 操作者处理标本时存在污染。另外，使用多糖类*药物、放化疗造成的黏膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性。
GM实验
检测的是半乳甘露聚糖（glactomannan,GM），半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝*释放，是较早释放的抗原，可以通过酶联*吸附试验法进行检测。
主要针对于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。曲霉菌感染部位主要集中在肺部，从而引起肺部侵袭性曲霉，诊断曲霉菌在肺部是定植还是侵袭性生长，关键在于其是否合成GM。GM试验常可在患者临床症状出现前5-8d获得阳性结果，并可对血清、脑脊液、肺泡或支气管灌洗液进行检测，因而往往可以使诊断提前。所以GM试验是诊断侵 袭性曲霉感染的微生物检查证据之一，通过检测GM值也可以作为**效果的参考指标之一。

使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦；
新生儿和儿童；
血液透析；
自身*性肝炎等；
食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物和污染的大米等。
释放入血循环中的曲霉GM（包括甘露聚糖）并不持续存在而是会很快清除；
以前使用了抗真菌药物；
病情不严重；
非粒细胞缺乏的患者。
G试验和GM试验检测的物质不同，代谢规律存在差异，影响因素也有较大差别，二者不能互相取代。二者联合应用可以提高对侵袭性真菌病的诊断能力。

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